土壤植酸酶（phytase）試劑盒說明書

更新時間：2025-01-13

瀏覽次數：983

土壤植酸酶（phytase）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉化為可供有機體利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對環境的污染，改善營養成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應用價值。

植酸酶在一定溫度和pH 值條件下，水解底物植酸鈉生成無機磷與肌醇衍生物，無機磷在酸性環境中與鉬酸銨顯色劑反應生成藍色復合物，在 700nm 處有特征吸收峰，根據 700nm 處吸光值變化可計算得植酸酶活性。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加緩沖液 30ml 配制，現用現配；用不完的試劑 4℃保存一個月。

顯色劑：粉劑×6 瓶，4℃避光保存，臨用前根據用量每瓶加 1ml 雙蒸水溶解，再加 4ml 試劑二混勻。

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，甲苯（不允許快遞）。

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干，過 30~50 目篩。

對照管

測定管

樣本（g）	0.06	0.06
甲苯	40	40
振蕩混勻，室溫放置 15min
緩沖液（µl）	1000
試劑一（µl）		1000
混勻，37℃孵育 24h，10000g，4℃離心 5min，取上清
上清	500	500
顯色劑（µl）	500	500
混勻，靜置 15min，測定 700nm 處吸光值，△A=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。

酶活性計算公式：

標準曲線：y = 1.759x + 0.0084，R² = 0.9977；x 為標準品濃度（μmol/ml ），y 為吸光值△A。

酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每克土樣每小時從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/h /g 土樣）=（△A-0.0084）÷1.759×V 反總÷W÷T

=0.41×（△A-0.0084）

V 反總：反應總體積，1.04ml ；T：反應時間，24h；W：樣本質量，0.06g。

1、顯色劑需要臨用前根據用量配制，每一瓶是 5 個樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經污染或者試劑過期，應放棄使用。

2、ΔA 線性范圍為 0.01-1。