AAT Bioquest16315 Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence* 100Tests

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發及藥物開發的科學家研發、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術。AAT Bioquest的產品幫助quan世界的科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest16315 Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence* 100Tests，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：16315

產品名稱：Cell Meter™熒光細胞內過氧化ya氮測定試劑盒*綠色熒光*

英文名稱：Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence*

產品規格：100 Tests

 AATBioquest 熒光細胞內過氧化ya氮試劑盒

產品說明：

過氧亞硝酸鹽（ONOO-）是一種強氧化性物質和高活性硝化劑。過氧亞硝酸鹽是由細胞中產生的超氧自由基和一氧化氮之間的反應形成的。它可以對多種生物分子造成損害，包括蛋白質、酶、脂質和核酸，最終導致細胞死亡。同時，過氧亞硝酸鹽還可以通過促進宿主對入侵病原體的防御反應而在體內具有保護活性。因此，過氧亞硝酸鹽是一種必需的生物氧化劑，參與一系列生理和病理過程。由于其極短的半衰期和低穩態濃度，檢測和理解過氧亞硝酸鹽在生物系統中的作用一直具有挑戰性。亞洲空運中心生物探索的DAX-J2™ PON Green就是為了解決這一未滿足的需求而開發的。它提供了一種靈敏的工具來監測活細胞中的ONOO-水平。亞洲空運中心生物探索的DAX-J2™ PON Green與細胞間ONOO-發生特異性反應，產生亮綠色熒光產品。它可用于熒光成像、流式細胞術和基于熒光酶標儀的測定。

平臺

熒光顯微鏡

Excitation 490 納米

Emission 530 納米

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規格 FITC過濾器套件

熒光酶標儀

Excitation 490 納米

Emission 530 納米

Cutoff 515 納米

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規格 底部讀取模式

組件

組件 A：DAX-J2™ PON 綠色 1瓶

組分B：檢測緩沖液 1 瓶（1 毫升/瓶）

組件C：DMSO 1 瓶（100 μL/瓶）

示例協議

一目了然

協議摘要

1. 在生長培養基中制備細胞

2. 將細胞與測試化合物和 DAX-J2™ PON Green 工作溶液共孵育 37oC 表示所需時間段

3. 在Ex/Em = 490/530 nm（截止= 515 nm）下監測熒光強度

重要說明

在開始實驗之前，將所有試劑盒組件置于室溫下。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。

1. DAX-J2 PON Green 儲備溶液 （500X）：

將 20 μL DMSO（組分 C）加入 DAX-J2™™ PON Green （組分 A）小瓶中，混合均勻。注意：20 μL 重構 DAX-J2™ PON Green 儲備溶液足以制作 1 個板。

工作溶液的制備

將 10 μL 500X DMSO 重構的 DAX-J2™ 過氧亞硝酸鹽傳感器儲備溶液加入 500 μL 檢測緩沖液（組分 B）中并充分混合。注意：工作溶液不穩定;使用前根據需要準備。

實驗方案樣本

1. 在細胞板中每孔加入 10 μL/孔（96 孔板）或 2.5 μL/孔（384 孔板）DAX-J2™ PON Green 工作溶液中。注意：染色前無需清洗細胞。建議在全培養基中對細胞進行染色。

2. 將細胞與 DAX-J2™ PON Green 與測試化合物在全培養基或所需的緩沖液中在 37°C 下共同孵育所需的時間，避光。對于對照孔（未處理的細胞），加入相應量的復合緩沖液。注意：建議在全培養基中對細胞進行染色。但是，如果測試化合物對血清敏感，則可以在染色前吸走生長培養基和血清因子。抽吸后加入 90 μL/孔（96 孔板）和 22.5 μL/孔（384 孔板）的 1X Hank 鹽溶液和 20 mM Hepes 緩沖液 （HHBS） 或您選擇的緩沖液。或者，可以在無血清培養基中對細胞進行染色。我們將 RAW 264.7 巨噬細胞與 50 - 200 μM SIN-1 和 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 的全培養基中共孵育 1 小時以誘導過氧亞硝酸鹽。有關詳細信息，請參見圖 1。

3. 或者，用 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 下對細胞進行染色 1 小時，避光。取出工作溶液，然后在全培養基或所需的緩沖液中用測試化合物在37°C下處理細胞所需的時間。

4. 使用酶標儀在Ex / Em = 490 / 530 nm（截止= 515nm）下以底部讀取模式監測熒光增加，或使用帶有FITC濾光片的熒光顯微鏡拍攝圖像。

  AATBioquest 熒光細胞內過氧化ya氮試劑盒

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