AAT Bioquest 5522 Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit 200Tests 

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發及藥物開發的科學家研發、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術。AAT Bioquest的產品幫助quan世界的科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest5522 Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit 200Tests，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：5522

產品名稱：Amplite®比色生wu素定量試劑盒

英文名稱：Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit

產品規格：200 Tests

 AAT Bioquest Amplite比色生wu素定量試劑盒

產品說明：

親和素/鏈霉親和素-生wu素相互作用是蛋白質與其配體之間已知zui強的非共價生物相互作用（Kd = 10-15 M-1）。一種親和素結合四種生wu素。生wu素和親和素/鏈霉親和素之間的鍵形成非常迅速，一旦形成，就不受pH值，有機溶劑和其他變性劑的影響。親和素和鏈霉親和素都具有基本上不可逆的生wu素結合特性，因為結合的生wu素只能通過使蛋白質的亞基變性來釋放。生wu素及其衍生物與各種親和素的緊密和特異性結合已在許多生物學應用中得到了廣泛的探索。Amplite® 比色生wu素定量試劑盒提供了一種方便的方法，用于估計生wu素-蛋白質偶聯物中生wu素與蛋白質的摩爾比或定量溶液中的生wu素濃度。該測定采用HABA（4'-羥基偶**-2-羧酸），這是一種與親和素結合時顯示顯著光譜變化的試劑。生wu素很容易從HABA/親和素復合物中置換HABA，導致500nm處的吸收減少。該試劑盒*適合用于測定2至16μM 范圍內的生wu素濃度。該測定可以以比色皿或微孔板形式進行。

組件

組分A：親和素 1瓶

組分B：HABA檢測緩沖液1瓶 （40mL）

組分C：d-生wu素1瓶（200μL、100μM）

示例協議

一目了然

協議摘要

1. 制備 HABA/親和素測定混合物（180μL）

2. 添加測試樣品（20μL）

3. 在室溫下孵育5分鐘

4. 監視器在500nm處的吸光度下降

重要

在開始實驗之前，將所有試劑盒組分解凍至室溫。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。

親和素儲備液（100X）

添加 400 μL ddH2O放入親和素（組分A）的小瓶中，充分混合。

注意 未使用的100X親和素儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在-20C下儲存。

工作溶液的制備

HABA/親和素檢測解決方案

將 200μL 親和素儲備溶液（100X）加入20mL HABA 檢測緩沖液（組分B）中，并充分混合。

注意HABA/親和素測定混合物的未使用部分可能在4°C下儲存長達一周。

實驗方案樣本

注意有必要在幾次稀釋度下測試含生wu素的樣品，以確保生wu素的濃度在測定線性范圍內，即2-16μM的生wu素（最終濃度）。

注意 避免使用含鉀的緩沖液，因為它會導致測定中的沉淀。

注意 游離生wu素必須通過凝膠過濾或透析與生wu素化蛋白分離。

1. 各加入20μL含生wu素的樣品，陰性對照（ddH2O或用于溶解含生wu素樣品的相同緩沖液），并將陽性對照（組分C）放入表96和表1中所述的2孔透明底部微孔板中。

2. 向含生wu素樣品、陰性對照和陽性對照的每個孔中加入 180 μL HABA/親和素測定溶液，使生wu素測定總體積為200μL/孔。

注意 對于比色皿形式，將100μL樣品與900μL HABA/親和素測定混合物一起加入。

3. 通過在5-100rpm的搖板器上振蕩，在室溫下孵育反應混合物200分鐘，避光并避免在移液過程中產生氣泡。

4. 用吸光度酶標儀在500nm處監測吸光度下降。

 AAT Bioquest Amplite比色生wu素定量試劑盒

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